CFSE Πρωτόκολλα

CFSE , ή καρβοξυφλουορεσκεϊνη -ηλεκτριμιδυλ - εστέρα, είναι μία φθορίζουσα διάλυμα χρώσεως των κυττάρων που χρησιμοποιούνται στη μετανάστευση λεμφοκυττάρων μελέτες. Τα λεμφοκύτταρα είναι τα λευκά κύτταρα του αίματος που έχουν τη δυνατότητα να κινηθούν από τη ροή του αίματος για να συλλάβει αλλοδαπό μικροοργανισμούς , που διαδραματίζουν σημαντικό ρόλο στην ανοσολογική άμυνα . CFSE μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί για τη σήμανση θυμοκύτταρα και εμβρυϊκών κυττάρων , σύμφωνα με την " Immunology and Cell Biology ". Ανθρώπινο λεμφοκυτταρικό χρώσης πρωτόκολλο
Η

Τεχνικοί προετοιμάσει ένα κυτταρικό εναιώρημα με 20 εκατομμύρια κύτταρα ανά ml σε - 0.1 τοις εκατό εμβρυϊκό βόειο ορό ( FBS) και αλατούχο φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα ( PBS) . Προσθέτουν CFSE και αφήστε το να καθίσει για αναστολή οκτώ λεπτά, σύμφωνα με το Πανεπιστήμιο του Κάνσας Ιατρικό Κέντρο . Προθερμασμένο FBS προστίθεται στη συνέχεια και τα κύτταρα επωάζονται σε ένα λουτρό ύδατος στους 98.6 βαθμούς Κελσίου για 10 λεπτά. Τα κύτταρα στη συνέχεια φυγοκεντρήθηκαν για πέντε λεπτά, το υπερκείμενο απορρίπτεται και τα κύτταρα πλένονται σε ένα διάλυμα από 2 τοις εκατό FBS /PBS τρεις φορές. Τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με παραφορμαλδεϋδη .
Εικόνων απλοποιημένα CFSE χρώσης πρωτόκολλο
Η

Τεχνικοί δείγματα αίματος φυγοκέντρησης , εξαλείφοντας τα ερυθρά αιμοσφαίρια . Αργότερα, πλύνετε τα λεμφοκύτταρα με PBS για την απομάκρυνση του ελεύθερου πρωτεΐνης. Να είναι σε θέση να παρατηρήσει κυτταρική διαίρεση μετά από δύο ημέρες , CFSE προστίθεται σε χαμηλές συγκεντρώσεις για οκτώ λεπτά, στη συνέχεια η αντίδραση μπλοκάρεται με ορό εμβρύου μόσχου. Τα κύτταρα πλένονται δύο φορές με PBS /FCS. Το πρωτόκολλο μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε " in vivo " και " in vitro " πειράματα , σύμφωνα με το Hedrick Lab στο Πανεπιστήμιο της Καλιφόρνια .

Η Πρωτόκολλο για την ενεργοποίηση των Naive κύτταρα CD8 T σε vitro
Η

μια αφελής κυττάρων Τ είναι ένα λεμφοκύτταρο που έχει διαφοροποιήσει στο μυελό των οστών . Αυτός ο τύπος κυττάρου θεωρείται ώριμη, και τα κύτταρα ανταποκρίνονται σε νέους παθογόνους ότι το ανοσοποιητικό σύστημα δεν έχει ποτέ συναντήσει. Τεχνικοί επωάζονται ιού της γρίπης και των κυττάρων τα δείγματα επί πάγου για 30 λεπτά , φυγοκεντρείται και να συνεχίσει τη διαδικασία επώαση για 18 ώρες στους 98,6 βαθμούς Fahrenheit. Αργότερα , τα κύτταρα βάφονται με CFSE και τα αποτελέσματα αναλύθηκαν σύμφωνα με κυτταρομετρία ροής .
Η
εικόνων