FITC Σύζευξη Πρωτόκολλα

ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη, που συνήθως αναφέρονται ως FITC - προφέρεται "ταιριάζει -c , " να ομοιοκαταληξία με το " ditsy » - είναι ένας φθορίζων δείκτης που είναι χημικώς δεσμευμένο , ή συζευγμένο , με άλλα μόρια όπως πρωτεΐνες και αντισώματα . Ένα αντίσωμα συζευγμένο με FITC μπορούσε επίσης να αναφέρεται ως ένα " FITC - επισημασμένο αντίσωμα. " FITC διεγείρεται από το φως σε ένα μήκος κύματος των 488 nm και εκπέμπει ενέργεια φθορισμού ανιχνεύθηκε στα 530 nm. Ένας επιστήμονας μπορεί να το δει με ένα μικροσκόπιο φθορισμού ή τη χρήση εξοπλισμού που ανιχνεύει τις εκπομπές φθορισμού και τις καταγράφει . Μέθοδοι
Η

FITC σύζευξη ακολουθεί ένα βασικό πρωτόκολλο . Για παράδειγμα , FITC και ένα αντίσωμα θα πρέπει να αναμιγνύονται μαζί σε μια ορισμένη αναλογία σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα και περιστράφηκε σε θερμοκρασία δωματίου για μία ώρα . Για την απομάκρυνση του μη δεσμευμένου FITC από το διάλυμα, αυτό χύθηκε πάνω σε μία στήλη χρωματογραφίας συγγενείας - ένα γυάλινο σωλήνα γεμάτο με ένα σφαιρίδιο -όπως γέλη που θα δεσμεύουν την μη συζευγμένη με FITC . Εν τω μεταξύ , το σημασμένο με FITC αντίσωμα θα ρέει μέσω της στήλης και συλλέγονται για χρήση .
Εικόνων Εκτιμήσεις
Η

Πριν από την έναρξη της σύζευξης , ο ερευνητής θα πρέπει να εξετάσει πολλά σημεία . Πρώτα , FITC είναι εξαιρετικά ασταθές και δεν θα πρέπει να εκτίθεται στο φως - θα πρέπει να διατηρούνται σε σωλήνες φύλλο καλύπτεται ανά πάσα στιγμή . Δεύτερον, ο χρόνος σύζευξη και η θερμοκρασία μπορεί να πρέπει να τροποποιηθεί για μια ευαίσθητη στη θερμοκρασία πρωτεΐνη. Τέλος , διάφορες πρωτεΐνες και αντισώματα μπορούν να έχουν διαφορετικές ΡΙΤΟ- δεσμευτικές ικανότητες , ώστε να βρεθεί η σωστή αναλογία αντισώματος προς FITC είναι κρίσιμη ? Πολύ λίγο FITC κάνει ένα αντίσωμα μη ανιχνεύσιμα και πάρα πολύ μπορεί να μεταβάλλει την ειδικότητα του. Για το λόγο αυτό , προκαταρκτικές συζεύξεις μικρής κλίμακας σε διαφορετικές αναλογίες του FITC προς αντίσωμα πρέπει να συσταθεί παράλληλα. Μόλις δημιουργηθεί η βέλτιστη αναλογία , η μεγάλης κλίμακας σύζευξη μπορεί να εκτελεστεί .

Η Χρησιμοποιεί
Η

γιατροί και οι επιστήμονες χρησιμοποιούν FITC - επισημασμένα αντισώματα , ορμόνες και την ανάπτυξη παράγοντες σε μια μεγάλη ποικιλία δοκιμασιών και εφαρμογές. Για παράδειγμα, ένας βλαστοκυττάρων που βρέθηκαν στο αίμα έχει ένα μόριο επί της επιφανείας του που ονομάζεται CD34 . Ένας τεχνικός εργαστηρίου μπορεί να αναμίξει το αίμα ενός ασθενούς με ένα σημασμένο με FITC αντίσωμα ειδικό για CD34 , και να τρέξει τα κύτταρα μέσω μιας μέτρησης κυτταρικής ροής που χρησιμοποιεί μια δέσμη λέιζερ για να κάνει το φθορίζουν FITC . Στη συνέχεια , η κυτταρόμετρου διαχωρίζει τα φθορίζοντα κύτταρα CD34 από τα υπόλοιπα κύτταρα του αίματος , και οι γιατροί μπορούν να χρησιμοποιήσουν αυτά τα απομονωμένα βλαστικά κύτταρα για θεραπευτικές αγωγές .
Η
εικόνων