Το πρωτόκολλο LacZ

LacZ είναι ένα βακτηριακό γονίδιο που παράγει το ένζυμο β- γαλακτοσιδάσης , η οποία διασπά τη λακτόζη σε γλυκόζη και γαλακτόζη . Το ένζυμο διασπά επίσης την ένωση του X-gal , η οποία παράγει ένα μπλε χρώμα που μοριακοί βιολόγοι χρησιμοποιούν ως δείκτη ή ανταποκριτή για την παρακολούθηση της παρουσίας του LacZ γονιδίου στα κύτταρα. Διαμόλυνση
Η

επιστήμονες συνδέουν το γονίδιο LacZ με ένα γονίδιο ενδιαφέροντος , όπως η ινσουλίνη , με ένα θραύσμα του DNA που ονομάζεται ένα πλασμίδιο . Χρησιμοποιούν χημικά ή ηλεκτρικά μεθόδους επιμόλυνσης για να πάρει το πλασμίδιο σε κύτταρα . Τα κύτταρα προσδιορίστηκαν ως προς την έκφραση του LacZ βήτα- γαλακτοσιδάσης , το οποίο θα σηματοδοτήσει επίσης την παρουσία του γονιδίου της ινσουλίνης .
Εικόνων στερεώσεως
Η

Μετά τη διαμόλυνση , τα κύτταρα αναπτύσσονται επί ένα πλαστικό τρυβλίο petri . Για τη δοκιμασία, το μέσο ανάπτυξης απομακρύνεται και τα κύτταρα πλένονται με φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα ( PBS) . Ένα φρέσκο ​​διάλυμα στερεώσεως φορμαλδεΰδης , μεθανόλης και γλουταραλδεϋδη χρησιμοποιείται για να καθορίσει τα κύτταρα για δύο λεπτά. Το στερεωτικό αφαιρείται και τα κύτταρα πλένονται και πάλι με PBS .

Η X-gal
Η

Ένα φρέσκο ​​διάλυμα χρώσης που περιέχει σιδηρι- X-gal , κάλιο κυανιούχο κάλιο και σιδηρο- κυανιούχο προστίθεται στα κύτταρα τη διάρκεια της νύχτας . Τα κύτταρα πλένονται και πάλι με PBS , και αν το γονίδιο LacZ είναι παρόν , η βήτα-γαλακτοσιδάση θα έχει διασπασθεί το X- gal και τα κύτταρα θα είναι μπλε .
Η
εικόνων